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您買的蛋白是您要的蛋白么?CUSABIO六大質控標準,100%捍衛蛋白品質

瀏覽次數:198      日期:2019年05月24日 13:37

 

 

重組蛋白是應用重組DNA或重組RNA的技術,從而獲得具有一定功能和活性的蛋白質。
重組蛋白是研究生物學過程的重要工具,除了在基礎科學研究包括:蛋白結構分析、蛋白功能研究、細胞培養等方面有十分重要的作用外,隨著近年來大分子藥物(蛋白藥物和單克隆抗體藥物)成為制藥行業發展速度最快的領域之一,重組蛋白在大分子藥物研發中也占據著關鍵性的位置。因此,要獲得高純度、活性接近天然蛋白的重組蛋白尤為重要。

 

 
酵母、大腸桿菌、昆蟲桿狀病毒、哺乳動物細胞表達系統在表達重組蛋白方面各有其優缺點。一個給定的表達系統能否高水平表達蛋白質并獲得高質量的產品,這在很大程度上取決于該蛋白質。在選擇表達方法時,必須認真地評估重組蛋白的特性及下游的應用。例如用于結構研究時,重組蛋白的表達要求正確的蛋白質折疊、形成正確的二硫鍵、均一的重組產物。

蛋白的物理穩定性變化主要是高級空間結構的改變,或者分子之間共價鍵的作用影響,導致蛋白質出現凝聚或沉淀,從而改變其性狀。化學穩定性可能來源于多種因素的影響,出現蛋白質分子的變化,如化學鍵的斷裂、新共價鍵形成等,生成蛋白質分子結構變異體,甚至是新的化學實體,從而喪失生物學活性,產生嚴重的毒副作用。

盡管蛋白質生物制品總體來說是相對穩定的分子,但是在生產、制劑和儲存過程中,還是會發生一些化學修飾和降解反應。許多蛋白質在純化過程中可能發生水解斷裂,而斷裂形成的片段污染物可能會導致患者免疫反應的不良后果。
由于存在化學修飾和降解反應,因此需要可靠而且靈敏的方法來評價研發和生產過程中蛋白質的純度和結構完整性。 完整蛋白質、完整亞基或結構域的精確質量測定對于蛋白質序列組成的快速確認和翻譯后修飾、降解和樣品處理引起的分子變異的鑒定非常有幫助。
 

 

華美生物(CUSABIO)蛋白表達平臺建立了從原核到真核四大重組表達系統,并建立無細胞表達系統,擁有基于昆蟲病毒外膜蛋白展示的蛋白表達技術、膜蛋白表達技術等一系列蛋白表達及純化技術,有能力制備各種高難度蛋白。
所提供的重組蛋白涵蓋細胞因子、通道蛋白、受體蛋白、酶、激素蛋白、疾病相關蛋白以及各種動植物及病原微生物蛋白等

 

 
同時華美生物所有蛋白產品都會經過嚴格的質量控制,包括蛋白質的濃度測定、純度測定、分子量檢測、內毒素檢測、活性檢測及蛋白測序等。
 

 

嚴格的質控流程

 

 
★蛋白質質量控制的流程圖如下:
 
1. 蛋白濃度測定
蛋白質濃度檢測的方法有bradford法、BCA法、A280法,根據緩沖成本選擇合的檢測方法,其中最常用的為bradford法,濃度檢測的范圍為1-5 mg/ mL。Bradford法標準曲線如下圖所示:
 

2. 蛋白分子量檢測
蛋白質分子量檢測采用考馬斯亮藍顯色結合SDS-PAGE檢測,分子質量跟氨基酸序列推測的理論分子質量一致。重組小鼠 Calreticulin(Calr)蛋白理論分子質量為73.3kDa,其檢測結果如下:

3. 蛋白質純度檢測
蛋白質純度檢測采用考馬斯亮藍顯色SDS-PAGE分離蛋白,通過bandscan軟件分析蛋白質的純度,蛋白質的純度需達到90%。

4. 蛋白內毒素檢測
內毒素檢測采用 LAL方法,內毒素含量低于1 EU/ μg。
 
5. 蛋白質活性檢測
蛋白質活性檢測有ELISA方法,細胞活性檢測,酶活性檢測方法三種方法,其中受體蛋白主要采用ELISA方法,細胞因子類蛋白采用細胞活性檢測法,酶類采用活性檢測方法。
 
Measured by its binding ability in a functional ELISA. Immobilized ACKR1 at 1 μg/ mL can bind human CCL2, the EC50 of human CCL2 protein is 48.64-60.24 μg/ mL.
Measured in a cytotoxicity assay using L‑929 mousefibroblast cells in the presence of the metabolic inhibitor actinomycin D. The ED50 forthis effect is 33.32-47.38 pg/ mL
 
6. 蛋白測序
蛋白質質譜鑒定是蛋白質組學研究的核心技術之一,是鑒定蛋白質的主要方法。質譜分析可分為兩類:MALDI-TOF和LC-MS / MS,其中,LC-MS / MS具有更高的靈敏度和幾乎100%的可靠性,這是文獻中最常用的方法。目前,從蛋白質樣品混合物中鑒定單一蛋白是蛋白質研究中的一個核心問題。分離蛋白質混合物有兩種常用方法:二維凝膠電泳(2-DE)和聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE,十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳)。

現今,華美生物的蛋白質凝膠條和凝膠點鑒定已經形成了一套成熟的流程,主要包括通過一維或二維電泳獲得目標蛋白條帶和斑點,并連續優化凝膠內酶解方法,然后通過LC-MS / MS分析獲得蛋白質碎裂芯片電荷,峰圖和其他相關信息。該方法可以顯著提高質譜鑒定的成功率和蛋白質凝膠消化中肽的覆蓋率。
 
 

 


目前,華美生物可提供70種天然蛋白、100種小分子抗原和582種活性蛋白,擁有1,000多種庫存重組蛋白華美生物已開發蛋白總數已突破6,100,所有跨膜蛋白總數更是高達36,000多種。為您的生物科學研究助力!

 

 

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